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2019-05-20

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备取黄果茄提取物2000mg,加注射用水900ml,1,2-丙二醇50ml,氯化钠9g,用0.1N的盐酸调pH值至4.0,加注射用水至1000ml,用0.2pm微孔滤膜过滤,灌封,湿热灭菌,得黄果茄提取物注射剂。实施例7黄果茄提取物灌胃给药对小鼠肝癌H22影响的实验研究选取1820g雌性C57BL/6小鼠,取生长良好的小鼠肝癌H22腹水,用生理盐水稀释成12xl(^个/ml浓度的细胞悬液,每只小鼠右腋皮下接种0.2ml,随机分组,每组动物数10只,对照组15只,设空白对照组(相应溶剂,25ml/kg,igx7)注射用环磷酰胺(30mg/kg,ipx7)黄果茄提取物(50mg/kg,igx7)黄果茄提取物(100mg/kg,igx7)黄果茄提取物(200mg/kg,igx7)黄果茄提取物用数滴吐温-80助溶后用0.5%CMC配成混悬液,注射用环磷酰胺用生理盐水配制成所需浓度。接种后次日起给药,给药体积为0.5ml/20g体重,连续经口灌胃7天。接种后10日脱颈处死动物,解剖取瘤块,称瘤重,计算抑瘤率。试验结果见表1,黄果茄提取物在50、100、200mg/kg的水平上经口灌胃给药时可以明显降低小鼠肝癌H22组织水平。给药7天后,各给药组与对照组相比,瘤重有显著差异(PO.Ol)。表1.黄果茄提取物灌胃给药对小鼠肝癌H22的抑瘤作用

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与对照组比较*P<0.05,**P<0.01。实施例8黄果茄提取物灌胃给药对小鼠Lewis肺癌影响的实验研究选取18~20g雌性C57BL/6小鼠,取生长良好的小鼠Lewis肺癌瘤块,用生理盐水匀浆法制备成12xl(^个/ml浓度的细胞悬液,每只小鼠右腋皮下接种0.2ml,随机分组,各组动物数6只,对照组12只,设空白对照组(相应溶剂,25ml/kg)注射用环磷酰胺(30mg/kg,ipx7)黄果茄提取物(50mg/kg,igx10)黄果茄提取物(100mg/kg,igx10)黄果茄提取物(200mg/kg,igx10)黄果茄提取物用数滴吐温-80助溶后用0.5%CMC配成混悬液,注射用环磷酰胺用生理盐水配制成所需浓度。接种次日起给药,给药体积为0.5ml/20g体重,连续经口灌胃10天。接种后14日脱颈处死动物,解剖取瘤块,称瘤重,计算抑瘤率。试验结果见表2,黄果茄提取物在50、100、200mg/kg的水平上经口灌胃给药时可以明显降低小鼠Lewis肺癌组织水平。给药IO天后,各给药组与对照组相比,瘤重有显著差异(PO.Ol)。表2.黄果茄提取物灌胃给药对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用
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实施例9黄果茄提取物皮下、腹腔给药对小鼠肝癌H22影响的实验研究选取1820g雌性C57BL/6小鼠,取生长良好的小鼠肝癌H22腹水,用生理盐水匀浆法制备成12xl(^个/ml浓度的细胞悬液,每只小鼠右腋皮下接种0.2ml,随机分组,各组动物数10只,对照组15只,设空白对照组(相应溶剂,25ml/kg)注射用环磷酰胺(30mg/kg,ipx7)黄果茄提取物(40mg/kg,scx10)黄果茄提取物(40mg/kg,ipx10)黄果茄提取物用数滴吐温-80助溶后用0.5。/。CMC配成混悬液,注射用环磷酰胺用生理盐水配制成所需浓度。接种次日起给药,给药体积为0.5ml/20g体重,连续皮下、腹腔给药7天。接种后10日脱颈处死动物,解剖取瘤块,称瘤重,计算抑瘤率。试验结果见表3,黄果茄提取物在40mg/kg的水平上皮下和腹腔给药时可以明显降低小鼠肝癌H22组织水平。给药7天后,黄果茄提取物40mg/kg皮下给药组、腹腔注射给药组与对照组相比,瘤重有显著差异(P<0.01)。表3.黄果茄提取物皮下、腹腔给药对小鼠肝癌H22的抑瘤作用
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与对照组比较*P<0.05,**P<0.01。实施例10黄果茄提取物皮下、腹腔给药对小鼠Lewis肺癌影响的实验研究选取1820g雄性C57BL/6小鼠,取生长良好的小鼠肺癌瘤块,用生理盐水匀浆法制备成12xl(^个/ml浓度的细胞悬液,每只小鼠右腋皮下接种0.2ml,随机分组,各组动物数IO只,对照组15只,设空白对照组(相应溶剂,25ml/kg)注射用环磷酰胺(30mg/kg,ipx7)黄果茄提取物(40mg/kg,scx10)黄果茄提取物(40mg/kg,ipx10)黄果茄提取物用数滴吐温-80助溶后用0.5。/。CMC配成混悬液,注射用环磷酰胺用生理盐水配制成所需浓度。接种次日起给药,给药体积为0.5ml/20g体重,连续皮下、腹腔给药10天。接种后14曰脱颈处死动物,解剖取瘤块,称瘤重,计算抑瘤率。试验结果见表4,黄果茄提取物在40mg/kg的水平上皮下和腹腔给药时可以明显降低小鼠Lewis肺癌组织水平。给药10天后,黄果茄提取物40mg/kg腹腔注射给药组与对照组相比,瘤重有显著差异(PO.Ol)。表4.黄果茄提取物皮下、腹腔给药对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用
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与对照组比较*P<0.05,**P<0.01。实施例11黄果茄提取物对正常小鼠餐后血糖的影响选取1820g雄性昆明种小鼠,按体重随机分为空白对照组(生理盐水)、正对照组(格列本脲2.5mg/kg)、给药组I(黄果茄提取物10mg/kg)和给药组II(黄果茄提取物20mg/kg),每组各6只,试验前18h禁食不禁水,灌胃给药后1、2、4、8、10h尾静脉采血,离心分离血桨后,用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)法测定葡萄糖水平。试验结果见表5,黄果茄提取物在10、20mg/kg的水平上可以明显降低正常小鼠餐后血糖水平。给药8h、10h后,20mg/kg剂量组与对照组相比,血糖值有显著差异(PO.Ol)。表5.黄果茄提取物对正常小鼠餐后血糖的影响
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与对照组比较*P<0.05,**P<0.01(n=6)。实施例12黄果茄提取物对实验性糖尿病小鼠餐后血糖的影响选取1820g雄性昆明种小鼠,24h禁食不禁水,按120mg/kg腹腔注射四氧嘧啶生理盐水液,lh后喂食,48h后尾静脉采血测定血糖水平,当血糖值达到200mg/100ml以上的小鼠定为糖尿病模型鼠。将其按体重随机分为空白对照组(生理盐水)、正对照组(格列本脲2.5mg/kg)、给药组I(黄果茄提取物10mg/kg)和给药组II(黄果茄提取物20mg/kg),每组各6只,灌胃给药后l、2、4、8、10h尾静脉采血,离心分离血浆后,用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)法测定葡萄糖水平。试验结果见表6,黄果茄提取物在10、20mg/kg的水平上可以明显降低实验性糖尿病小鼠餐后血糖水平。给药4h、8h和10h后,各剂量组与对照组相比,血糖值有显著差异(PO.Ol)。表6.黄果茄提取物对实验性糖尿病小鼠餐后血糖的影响
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实施例13黄果茄提取物对豚鼠实验性哮喘的影响选取200250g健康豚鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、给药组I(黄果茄提取物10mg/kg)和给药组II(黄果茄提取物20mg/kg),每组各6只。以卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘豚鼠模型。检测血清NO、T-NOS、iNOS水平。试验结果见表7,黄果茄提取物在IO、20mg/kg的水平上可以明显降低血清NO、T-NOS及iNOS水平,与模型组比较有显著差异(P<0.05)。表7.黄果茄提取物对豚鼠实验性哮喘的影响
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实施例14黄果茄提取物对心肌缺血再灌注损伤的保护作用采用离体大鼠灌流心脏(Langendorffheart)缺血再灌注模型,用含黄果茄提取物的K-H氏缓冲液灌注心脏,检测心肌组织中MDA含量和再灌15min灌流液中LDH活性,此两指标能间接反映与心肌损伤密切相关的氧自由基水平变化。记录各组的室颤发生率。再灌注引起的结果如表8、9、IO所示。表8.黄果茄提取物对离体大鼠灌流心脏室颤发生率的影响
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表9.黄果茄提取物对离体心肌组织MDA含量的影响
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注与阴性对照组相比,*P<0.05,**P<0.01(w=12)。表10.黄果茄提取物提取物对再灌灌流液中LDH活性的影响
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注与阴性对照组相比,*P<0.05,**P<0.01(n=12)。以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。权利要求1、黄果茄提取物,包含澳洲茄碱和茄边碱,还包含刺茄碱,其中澳洲茄碱、茄边碱和刺茄碱三者的总含量为80wt%~99wt%。2、如权利要求1所述的黄果茄提取物,其特征在于,澳洲茄碱含量为30wt%50wt%,茄边碱含量为10wt%30wt%,刺茄碱含量为30wt%50wt%。3、一种制备权利要求1所述的黄果茄提取物的方法,其特征在于,包括以下步骤(1)黄果茄果实,加乙醇提取,收集提取液A;(2)回收提取液中的乙醇至无醇味,得浓縮液B;(3)浓縮液B用阳离子交换树脂吸附,依次用水、乙醇和含碱乙醇进行洗脱,收集含碱乙醇洗脱部分C;(4)含碱乙醇洗脱部分C,回收乙醇得浓縮液D;(5)浓縮液D离心分离,弃上清液,得沉淀物E;(6)沉淀物E用水洗涤至近白色且上清液pH值小于9,沉淀干燥后即得黄果茄提取物。4、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(1)中,乙醇的用量每次为生药量的28倍体积;乙醇的重量百分比浓度为50%95%。5、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(1)中,乙醇的用量每次为生药量的5倍体积;乙醇的重量百分比浓度为90%。6、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(1)中,采用回流或超声方式提取,提取次数为25次,每次13小时。7、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(1)中,采用回流方式提取,提取次数为3次,每次1.5小时。8、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(3)中,所述阳离子交换树脂的用量为生药量的0.55倍体积。9、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(3)中,所述阳离子交换树脂的用量为生药量的1倍体积。10、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(3)中,所述阳离子交换树脂的功能基为磺酸基、甲基磺酸基、磷酸基、羧基和酚轻基之中的一种。11、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(3)中,所述阳离子交换树脂的功能基为磺酸基。12、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(3)中,采用的洗脱方法为依次用水洗树脂至流出液近无色,110倍树脂体积的重量百分比浓度为30%90%的乙醇洗脱,0.510倍树脂体积的含碱乙醇洗脱。13、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(3)中,采用的洗脱方法为依次用水洗树脂至流出液近无色,12倍树脂体积的重量百分比浓度为30%60%的乙醇洗脱,15倍树脂体积的90%的乙醇洗脱,15倍树脂体积的含碱乙醇洗脱。14、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(3)中,采用的洗脱方式为依次用水洗树脂至流出液近无色,1倍树脂体积的重量百分比浓度为40%的乙醇洗脱,2倍树脂体积的90%的乙醇洗脱,3倍树脂体积的含碱乙醇洗脱。15、如权利要求3或12或13或14所述的方法,其特征在于,所述含碱乙醇是重量百分比浓度为5095°/。乙醇与碱的混合溶液,其中碱为氨水、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠以及其它工业生产常用的碱之中的一种。16、如权利要求3或12或13或14所述的方法,其特征在于,所述的含碱乙醇是重量百分比浓度为90%乙醇与重量百分比浓度为25%氨水按体积比10:1混合的溶液。17、如权利要求3所述的方法,其特征在于,在上述步骤(6)中,如果沉淀物E颜色较深,增加一用丙酮洗涤沉淀至近白色的步骤。18、如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的阳离子交换树脂可以再生,其再生的方法是用2%氢氧化钠水溶液加热浸泡树脂;装柱,用2W的氢氧化钠水溶液800ml洗脱;用水洗至流出液呈中性;用1N盐酸洗树脂至流出液pH值为2;用去离子水洗树脂至流出液pH值为6,即可投入重复使用。19、如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述步骤(6)获得的黄果茄提取物中澳洲茄碱含量为30wt%50wt%,茄边碱含量为10wt%30wt%,刺茄碱含量为30wt%50wt%,澳洲茄碱、茄边碱和刺茄碱三者的总含量为80wt%99wt%。20、一种权利要求12所述的黄果茄提取物的药物用途是以所述的黄果茄提取物中的澳洲茄碱、茄边碱和剌茄碱作为活性成分,加入药学上可接受的辅料,制成的任何一种剂型的药物。21、如权利要求20所述的用途,其特征在于,所述的剂型为注射剂。22、一种权利要求12所述的黄果茄提取物作为活性成分在制备预防和治疗肿瘤药物中应用。23、一种权利要求12所述的黄果茄提取物作为活性成分在制备预防和治疗糖尿病药物中应用。24、一种权利要求12所述的黄果茄提取物作为活性成分在制备预防和治疗哮喘病药物中应用。25、一种权利要求12所述的黄果茄提取物作为活性成分在制备预防和治疗冠心病药物中应用。全文摘要本发明涉及一种黄果茄提取物、其制备方法及其药物用途。澳洲茄碱、茄边碱和刺茄碱三者的总含量为80wt%~99wt%,其中澳洲茄碱含量为30wt%~50wt%,茄边碱含量为10wt%~30wt%,刺茄碱含量为30wt%~50wt%。本发明还涉及到这种黄果茄提取物制备方法和作为活性成分制备预防和治疗肿瘤、糖尿病、哮喘病、冠心病等疾病的药物的用途。软件定制开发方案

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